伯乐bio-rad转印槽的使用方法步骤
点击次数:10 发布时间:2019-08-27 打印本页面 返回
伯乐bio-rad转印槽的使用方法步骤:
  全程请戴手套操作,以免污染伯乐bio-rad转印槽!
  1)电泳后SDS-PAGE 胶片浸在转印缓冲液中,洗2~3 次,每次10min.
  2)取出伯乐bio-rad转印槽,先小心放一搅拌子在底部,再倒一半转印缓冲液。
  3)取转印纸切成约如胶片大小,先在方形培养皿中以少许甲醇浸湿数秒钟,再置入伯乐bio-rad转印槽中的缓冲液10 min 后使用。 另取两张滤纸,以及两片方形海绵垫,都放在伯乐转印槽的缓冲液中备用。
  4)取出转印夹打开平放,先垫一张方形海棉垫,铺上一张湿滤纸,小心平铺SDS-PAGE胶上去,然后小心迭上已润湿的转印纸,用涂菌玻璃棒赶出气泡;转印纸再滴上数滴缓冲液后,加盖一层滤纸,及另一张海绵,也都不可陷入气泡,即可把整个转印三明治卡夹装好。
  胶迭到转印纸时,一次成功,不要重作,否则蛋白质色带可能会印上去,产生重迭影像。
  5)将转印三明治置入已经放有一半转印缓冲液的伯乐bio-rad转印槽中,注意有转印纸的那一面向正极(红色),胶片那面向负极(黑色)。
  6)当三明治都放入伯乐bio-rad转印槽后,以转印缓冲液盖满所有的三明治,小心动一动卡夹,除去附在卡夹内外的气泡,盖上盖子,放到一搅拌器上,打开搅拌器开始搅拌,同时接好电源,装置完成后放置10 min.
  7)以300mA开始转印,温度会渐渐上升,转印1.5 h左右 后中止转印,取出转印三明治,打开后依次取出转印纸及胶。
  具体转印条件要根据蛋白的大小进行优化,注意低温。
  8)转印后的胶片可以继续进行染色,看有无蛋白质残留。若电泳时加有蓝色标准蛋白质marker(SeeBlue),则可在转印纸上看到蓝色的色带,确定转印成功,并可评估转印效率。

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